Smart Biopreservation

Encapsulation des ARN purifiés

Référencement et réception des échantillons

La plateforme peut recevoir soit des matériels biologiques soit des ARN déjà purifiés. Les échantillons sont référencés dans le LIMS (Laboratory Information Management System) avant leur arrivée sur la plateforme de service, où ils sont étiquetés avec un code unique généré par le LIMS (étiquette code à barres). D’autres options de référencement sont possibles, comme l’étiquetage par le client avant l’envoi des échantillons.

La procédure de transport des échantillons biologiques et la température de conservation à réception sont définies avec le client, en conformité avec les règles de biosécurité et de biosûreté (voir le règlement de service, consultable sur demande).

Extraction et purification des ARN

Les matériels biologiques sont extraits selon une méthode convenue avec le client, automatisée ou manuelle selon les cas. Pour plus de précisions concernant les offres d’extractions et les matériels biologiques pris en charge, consulter la rubrique extractions.

Il est fortement conseillé de stabiliser les ARN dans les matériels biologiques au moment du prélèvement afin de maximiser la qualité de l’ARN (Sang prélevé dans des tubes Paxgene par exemple).

Contrôle qualité des ARN

Tous les échantillons d’ARN extraits par la plateforme subissent un contrôle qualité permettant de connaître la quantité et la qualité d’ARN extrait. Pour les ARN purifiés envoyés par le client, cette prestation est optionnelle, et modulable.

En routine, la quantité et la qualité de chaque échantillon ARN sont déterminées par deux mesures :

  • Mesure de l’absorbance par spectrophotométrie UV entre 220 et 320nm (spectre) et détermination des rapports de DO A260/A280, A260/A230
  • Mesure de l’intégrité des ARN sur puce microfluidique (type Agilent Bioanalyzer ou Perkin Elmer LabChip).

La combinaison de ces analyses permet de savoir si l’ARN est en assez grande quantité pour satisfaire la demande, s’il est pur et de bonne qualité. Les volumes à aliquoter par capsule sont calculés par défaut en fonction de la concentration obtenue par mesure spectrophotométrique.

Aliquotage des ARN

Cette opération entièrement automatisée permet de répartir chaque échantillon d’ARN selon la quantité ou le volume d’ARN par capsule et/ou le nombre de minicapsules demandés par le client.

Une solution de stabilisation est ajoutée aux solutions d’ARN avant l’aliquotage.

Lors de cette opération, le code à barres de chaque échantillon d’ARN est associé aux codes Datamatrix de ses minicapsules et les informations sont automatiquement enregistrées dans le LIMS.

Dessiccation des ARN

Au cours de cette étape, les échantillons subissent une déshydratation primaire par le vide dans un évapo-concentrateur permettant de maîtriser les différents paramètres de séchage (descente en pression, température de l’enceinte).

Encapsulation des ARN

Après l’étape de dessiccation primaire, les portoirs d’étuis d’ARN ainsi que les bouchons sont introduits dans une enceinte garantissant un environnement contrôlé (anoxique, anhydre) et inerte (argon, hélium).

Sous cette atmosphère, à l’abri des facteurs d’altération, l’étui et le bouchon de chaque minicapsule sont assemblés et scellés par soudage Laser YAG pulsé pour une étanchéité rigoureuse, sans élévation de température.

Chaque minicapsule subit après soudage, un contrôle d’étanchéité systématique effectué par un détecteur de fuites (détection d’hélium par spectrométrie de masse), permettant de garantir une étanchéité rigoureuse. En cas de fuite détectée, l’échantillon est ré-encapsulé.

Livraison des minicapsules

Les minicapsules sont livrées sur leurs portoirs de stockage à l’adresse indiquée par le client ou stockées pour compte sur la plateforme. Les données de correspondance entre les identifiants du client et les codes 2D des minicapsules (et les données de contrôle qualité le cas échéant), sont également exportées de la base de données du LIMS et fournies lors de la livraison.